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            人外周血單核細胞(PBMC)分離及培養

            PBMC(peripheral blood mononuclear cell),外周血單個核細胞,顧名思義,其主要細胞類型為血液里邊具有單個核的細胞,主要包括淋巴細胞(T\B),單核細胞,吞噬細胞,樹突狀細胞和其他少量細胞類型。其中淋巴細胞占很大一部分。分離PBMC的主要目的是為了將多核細胞和紅細胞去除,從而能夠很方便地模擬體外的血液免疫環境。

              Ficoll是蔗糖的多聚體,呈中性,平均分子量為400,000,當密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞,就可從外周血中分離到單個核細胞。


            1、將靜脈血20ml用ACD抗凝劑以容積比血:抗凝劑=9:1抗凝處理

            2、按血:分離液=1:2注入國產淋巴細胞分離液上層,400g 20℃離心30分鐘

            3、交接層重浮于4倍體積的RPMI1640并通過離心法200g,10min洗三次

            4、獲得細胞可做分選或其他實驗。





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